图A, 转录耦合编辑器TEd与CEd传统编辑方法差别。图B, 使用TEd系统的细胞中可以观察到有较CEd更多的环绕核膜的GFP荧光信号出现(LMNA-GFP整合),表明TEd系统可以更高效地在目标位点插入GFP标签。
基于这一推测,团队开发了一系列优化的TEd基因编辑系统,通过在同源供体质粒上引入启动子以形成TC-供体(Transcription-Coupled HR-donor),并在其转录产物TC-RNA的3’端添加多个MS2茎环结构,以及在Cas9上融合MS2适配体的结合结构域(MCP)。经验证,TEd系统在几种哺乳类测试细胞中的编辑效率相比传统CRISPR/Cas9介导的编辑方法(CEd)提高了10倍左右。TEd系统不仅解决了传统基因编辑方法效率较低的问题,还为将来在表观遗传学的层面探索DNA重组修复机制提供了良好的基础。11、Nat Commun:CRISPR/Cas9基因编辑可能导致细胞毒性和基因组不稳定性在一项新的研究中,西班牙巴塞罗那生物医药研究所研究员Fran Supek博士及其研究团队报告说,根据人类基因组的靶序列位点,CRISPR/Cas9基因编辑可以引起细胞毒性和基因组不稳定性。这种不想要的影响是由关键的肿瘤抑制蛋白p53介导的,并由编辑位点附近的DNA序列和周围区域的多种表观遗传因子决定。相关研究结果于2022年8月4日发表在Nature Communications期刊上,论文标题为“TP53-dependent toxicity of CRISPR/Cas9 cuts is differential across genomic loci and can confound genetic screening”。